如何運用單克隆-多克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色 
    在細(xì)胞染色實驗中，常用單克隆或多克隆抗體。一般而言，多抗能夠提供較強的信號，而單抗的背景清晰。只要注意其特點，2種抗體都可以有效地利用。
 
（一）用多克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
    良好的多抗血清包含多種針對抗原不同表位的抗體，雖然空間競爭阻止大量抗體與抗原分子結(jié)合，但數(shù)個抗體分子的結(jié)合往往得到較強的信號。能夠產(chǎn)生信號強信號是用多抗進(jìn)行細(xì)胞染色的主要優(yōu)點。
    多抗血清中除了含有特異性抗體外，還含有較高濃度的無關(guān)抗體，這些抗體包括動物血清中所有的抗體成分。這些抗體是細(xì)胞染色的zui大。用多克隆抗體可以帶來令人滿意的結(jié)果，但必須仔細(xì)設(shè)立對照。這包括仔細(xì)滴定一抗，盡量減低無關(guān)抗體產(chǎn)生的信號，仔細(xì)比較對照血清的染色結(jié)果。
    即使血清來自未經(jīng)免疫的動物，在高濃度情況下，也能引起較強的背景色。部分原因是由于抗體的非特異性附著在經(jīng)固定后的細(xì)胞上，部分是由于血清中抗體特異性結(jié)合所致。由于這些抗體在血清中并非主要活性成分，因此可以通過稀釋抗體使其信號降低至不被檢測出的程度。第二種降低這些背景信號的方法是用丙酮干燥粉預(yù)先吸收多抗血清。第三種方法是去除血清中的非特異性抗體，利用免疫親和純化的方法可以得到適用于細(xì)胞染色的良好的抗體來源。在某些情況下，利用免疫親和法純化抗體是得到清晰染色結(jié)果的基本步驟之一。
    由于多抗血清包含的抗體通常是針對抗原的多種表位，包括不易變性的表位，因此這些抗血清在用于經(jīng)過*固定的標(biāo)本染色時效果較好，尤其是用于經(jīng)甲醛固定標(biāo)本的染色。
 
（二）用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
    用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色往往得到良好結(jié)果，因為單抗純度高、特異性強，在較寬的濃度范圍內(nèi)染色的背景色清晰。對經(jīng)有機溶劑或甲醛固定的細(xì)胞，大部分單抗可以得到較好的染色結(jié)果，盡管如此，部分單抗的染色結(jié)果不理想。這可能由下列兩個原因造成：抗原表位被覆蓋在細(xì)胞結(jié)構(gòu)之內(nèi)；或者在固定過程中被破壞。
    用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色時偶爾也出現(xiàn)交叉反應(yīng)。這種交叉反應(yīng)是特異性的，可能是因為在不同的細(xì)胞組分中存在共同表位。單抗與細(xì)胞內(nèi)高濃度多聚體蛋白，如細(xì)胞骨架蛋白所致的交叉反應(yīng)是常見的。這種交叉反應(yīng)一般較弱，但如果抗原濃度較高且雙價連接，將使交叉反應(yīng)信號增強。應(yīng)盡可能應(yīng)用一系列針對同一抗原不同表位的單克隆抗體來確定抗原的位置。
 
（三）用混合的單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
應(yīng)用混合單抗進(jìn)行細(xì)胞染色能夠增強染色信號，只要混合的單抗沒有競爭作用，增強信號強度意味著實驗成功。但應(yīng)注意，在混合抗體前，每一種單抗應(yīng)分別經(jīng)過測試。

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